בשער-קהילה אקדמית למען החברה בישראל בשער בפייסבוק - קהילה אקדמית למען החברה בישראל בשער - קהילה אקדמית למען החברה בישראל בשער - קהילה אקדמית למען החברה בישראל
דף הבית   |   על בשער   |   פעילויות בשער   |   ספר אורחים   |   צור קשר      רשימת תפוצה
 
 
 > שלח שאלה למומחה
 
 
 
     כל התחומים
     
     
     
     
     
     אסטרופיזיקה
     הנדסת חשמל
     הנדסת מזון
     כימיה
     פרקינסון
     קרקע ומים
     ננוטכנולוגיה
     הנדסה
     מדעי המחשב
     כימיה
     ביולוגיה
     פיזיקה
     רפואה
     מתמטיקה
     מדעי הסביבה
     גיאוגרפיה
     מוט"ב
     הוראת המדעים
     אזרחות
     כלכלה
     היסטוריה
     משפטים
     פסיכולוגיה
     תנ"ך
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 > בשער האזרחות
 
 
 > הרצאות מומחים ברשת
 
 
 > רשימת תפוצה
 
 > חתום בספר האורחים
 
 > כניסה לשואלים רשומים
 
 
 > English
 
שאלה מספר 9625 - יצירת ספריית cDNA תאריך: 14/12/2017
תחומי דעת:  ביולוגיה  
למדנו בכיתה שכאשר יוצרים ספריית DNA גנומי, חותכים DNA מסוים באנזימי הגבלה (שחותכים חיתוך מדורג וכך משאירים קצוות דביקים), וחותכים DNA של נשאים באנזימי הגבלה זהים, וכך ניתן להחדיר את המקטעים שנוצרו מהDNA שחתכנו אל תוך הנשאים (הקצוות הדביקים מתחברים). בנוסף, למדנו שביצירת ספריית cDNA, מפיקים את כל הmRNA מתא מסוים, מתעתקים במהופך את הRNA לDNA, ואז את הDNA שנוצר מחדירים לנשאים. השאלה שלי היא איך מחדירים את הDNA שיצרנו, שהרי אין לו קצוות דביקים, ולא ניתן לחתוך אותו עם אנזימי הגבלה (על מנת ליצור קצוות דביקים), שכן כל הרצף שבידנו הוא CDS ולכן אי אפשר להוריד חלקים ממנו. ואם הפתרון הוא פשוט, ויש שיטה להחדיר DNA עם קצוות רגילים (ולא דביקים) בעזרת חיתוך חלק של DNA הנשא, אז מדוע משתמשים בקצוות דביקים כאשר יוצרים ספריית DNA גנומי? אשמח לתשובות, תודה רבה, פלג אופק.
תשובה מאת: פרופ' גדי שוסטר
   

שלום פלג,

אכן שאלתך בהחלט במקומה. ראשית, ישנן שיטות להכנסת מקטעי DNA לנשאים פלסמידים ללא חיתוך האנזימי רסריקציה (הגבלה). אולם, אתה צודק שהדרך הכי נכונה הינה באמצאות אנזימי הגבלה. כאשר משעתקים לאחור את הmRNA ל cDNA מכניסים בקצוות של ה בDNA אתרים לאנזימי הגבלה.

אתה יודע שכדי לשעתק RNA לאחור צריך להשתמש בתחל (פרימר).  לתחל זה מוסיפים רצף נוקלואוטידים אשר יוצר אתר לאנזים הגבלה. יוצרים גדיל אחד המשלים ל RNA. לאחר מכן יוצרים את הגדי השני של ה DNA כאשר ה RNA משמש כתחלים. לאחר מכן מדביקים לו בליגציה של קצוות לא דביקים מקטע קטן של DNA הנושא אתר לאנזים הגבלה (ראה תרשים מצורף).

בהצלחה

פרופ' גדי שוסטר
דיקן הפקולטה לביולוגיה
הטכניון

הוסף תגובה הדפס שאלה      שלח לחבר      שאלות מועדפות
שלח שאלה למומחה   |   שמור כדף הבית   |   הוסף למועדפים   |   תנאי שימוש באתר   |   Powered By Art-Up